定制服务
大肠杆菌蛋白表达与纯化
多数大肠杆菌项目失败在可溶性而非表达量——因此我们在放大前先做溶解性筛选。
在不需糖基化的前提下，大肠杆菌仍是获得重组蛋白最快、成本最低的路径。常见失败并非表达量低，而是聚集：胶上条带很亮，但全部位于沉淀中。
流程从基质筛选开始：宿主菌株、诱导温度、IPTG 浓度与融合标签，在投入发酵前完成小规模溶解性矩阵。若靶标始终不溶，则转入复性工艺，或改用真核宿主并向客户说明原因。
交付内容
- 1–10 mg 纯化蛋白，SDS-PAGE 纯度 ≥90%。
- 覆盖所有测试条件的溶解性筛选报告。
- 载体图谱、表达与纯化记录。
- 可选标签切除、内毒素检测与冻干。
服务流程
载体设计
密码子优化、标签位置（N/C 端 His、SUMO、GST）与酶切位点选择。
表达筛选
BL21(DE3)、Rosetta 与 SHuffle 宿主，16 °C、25 °C、37 °C 条件下 SDS-PAGE 分析可溶组分。
发酵
摇瓶或 10–100 L 补料分批发酵，控制溶氧与补料速率。
纯化
Ni-NTA 或谷胱甘肽亲和捕获，离子交换精纯，必要时分子排阻。
质控放行
SDS-PAGE 与 HPLC 纯度、质谱身份确认、内毒素与浓度报告。
规格与周期
- 规模
- 0.1 L 筛选至 100 L 发酵
- 产量
- 可溶靶标通常 5–50 mg/L
- 纯度
- ≥90%，经精纯可达 ≥95%
- 周期
- 自基因到纯化蛋白 4–6 周